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色譜法根據(jù)分離原理可分為
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本文目錄:
一、色譜分離技術(shù)的色譜種類
色譜有多種,按固定相類型和分離原理可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、親和色譜、大孔吸附樹脂、凝膠色譜、聚焦色譜等。最常用的是吸附色譜分離技術(shù)。
吸附色譜法是指混合物隨流動相通過吸附劑(固定相)時,由于吸附劑對不同物質(zhì)具有不同的吸附力而使混合物中各組分分離的方法。此法特別適用于脂溶性成分的分離。被分離的物質(zhì)與吸附劑、洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析的三要素,彼此緊密相連。
二、色譜法可以按照什么來分類?
按色譜法分離所依據(jù)的物理或物理化學(xué)性質(zhì)的不同,又可將其分為5類,分別是:
1、吸附色譜法:利用吸附劑表面對不同組分物理吸附性能的差別而使之分離的色譜法稱為吸附色譜法。適于分離不同種類的化合物(例如,分離醇類與芳香烴)。
2、分配色譜法:利用固定液對不同組分分配性能的差別而使之分離的色譜法稱為分配色譜法。
3、離子交換色譜法:利用離子交換原理和液相色譜技術(shù)的結(jié)合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法,利用被分離組分與固定相之間發(fā)生離子交換的能力差異來實現(xiàn)分離。
離子交換色譜主要是用來分離離子或可離解的化合物。它不僅廣泛地應(yīng)用于無機離子的分離,而且廣泛地應(yīng)用于有機和生物物質(zhì),如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等的分離。
4、尺寸排阻色譜法:是按分子大小順序進行分離的一種色譜方法,體積大的分子不能滲透到凝膠孔穴中去而被排阻,較早的淋洗出來;中等體積的分子部分滲透;
小分子可完全滲透入內(nèi),最后洗出色譜柱。這樣,樣品分子基本按其分子大小先后排阻,從柱中流出。被廣泛應(yīng)用于大分子分級,即用來分析大分子物質(zhì)相對分子質(zhì)量的分布。
5、親和色譜法:相互間具有高度特異親和性的二種物質(zhì)之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質(zhì)分離的色譜法。例如利用酶與基質(zhì)(或抑制劑)、抗原與抗體,激素與受體、外源凝集素與多糖類及核酸的堿基對等之間的專一的相互作用;
使相互作用物質(zhì)之一方與不溶性擔(dān)體形成共價結(jié)合化合物,用來作為層析用固定相,將另一方從復(fù)雜的混合物中選擇可逆地截獲,達到純化的目的??捎糜诜蛛x活體高分子物質(zhì)、過濾性病毒及細胞?;蛴糜趯μ禺惖南嗷プ饔眠M行研究。
其應(yīng)用:
色譜法的應(yīng)用可以根據(jù)目的分為制備性色譜和分析性色譜兩大類。
制備性色譜的目的是分離混合物,獲得一定數(shù)量的純凈組分,這包括對有機合成產(chǎn)物的純化、天然產(chǎn)物的分離純化以及去離子水的制備等。
相對于色譜法出現(xiàn)之前的純化分離技術(shù)如重結(jié)晶,色譜法能夠在一步操作之內(nèi)完成對混合物的分離,但是色譜法分離純化的產(chǎn)量有限,只適合于實驗室應(yīng)用。
分析性色譜的目的是定量或者定性測定混合物中各組分的性質(zhì)和含量。定性的分析性色譜有薄層色譜、紙色譜等,定量的分析性色譜有氣相色譜、高效液相色譜等。色譜法應(yīng)用于分析領(lǐng)域使得分離和測定的過程合二為一,降低了混合物分析的難度縮短了分析的周期,是比較主流的分析方法。
在中華人民共和國藥典中,共有超過約600種化學(xué)合成藥和超過約400種中藥的質(zhì)量控制應(yīng)用了高效液相色譜的方法。
三、簡述色譜法的四種原理機制
色譜法的原理是待分離物質(zhì)分子在固定相和流動相之間分配平衡的過程,不同的物質(zhì)在兩相之間的分配會不同,這使其隨流動相運動速度各不相同,隨著流動相的運動,混合物中的不同組分在固定相上相互分離。根據(jù)物質(zhì)的分離機制,又可以分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、親和色譜等類別。
四、色譜法分離是根據(jù)什么原理進行的
色譜分離法;chromatographic
separation
在工業(yè)上應(yīng)用色譜分析原理分離性質(zhì)近似組分的方法。使溶液分批通過垂直的填充吸附劑固定床,將各種組分分離精制。色譜柱內(nèi)的填充吸附劑是多孔的惰性固體,用非揮發(fā)性的惰性液體涂漬。被分離溶液的溶質(zhì)與惰性液體有大小不同的溶解度。如果被吸附的物質(zhì)是氣體,發(fā)生“吸收”現(xiàn)象。如果被吸附的物質(zhì)是液體,發(fā)生“萃取”現(xiàn)象。分離系數(shù)取數(shù)聚決于分配系數(shù)的大小。常用的操作法有:(1)迎頭分離法,當(dāng)溶液連續(xù)通入吸附固定床時,溶液中諸組分因吸附能力大小不同,可順序地由固定床另一端排出;(2)沖洗分離法,在送入溶液的同時,通入不被吸附的載體,可順序地被吸附和解吸,然后以一定的間隔隔離開;(3)頂替分離法,在載氣中加入吸附能力最強的組分,使依次頂替被吸附的諸組分。色譜分離除已在分析技術(shù)中廣泛應(yīng)用外,也已在化工、冶金和環(huán)保等領(lǐng)域中加以利用。
色譜的分離原理都是利用待測物質(zhì)在流動相和固定相兩相間的分配系數(shù)的不同而實現(xiàn)分離.
對于氣液色譜來說,分離原理是利用不同物質(zhì)在流動相以及固定液中的分配系數(shù)(溶解度)不同而實現(xiàn)分離;當(dāng)流動相流動時,流動相是溶解性相近的惰性氣體,而固定相的溶解性隨固定液的不同而不同,所以分配系數(shù)主要決定于固定液的性質(zhì)。
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